僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。
豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體（FMDV）檢測試劑盒（ELISA）
說明書
貨號：INS0010004
使用前，請務(wù)必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術(shù)支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進行實驗。
黃石市艾恩斯生物科技有限公司
網(wǎng)址：www.inselisa.com
電話：0714-6338558
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測試劑盒（ELISA）
英文名稱：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus NSP（ELISA）
【包裝規(guī)格】
48T/盒，96T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑用于檢測豬血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，可用于豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體疫苗免疫效果評價。
【檢驗原理】
本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預(yù)包被豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體抗原（固相抗原，貨號：INS0010004C）的微孔酶標(biāo)板中，加入豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陰陽性對照（貨號：INS0010004J）和待測樣本，溫育洗滌，再加入另一株HRP標(biāo)記的酶標(biāo)抗體（酶標(biāo)抗體，貨號：INS0010004E），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的濃度正相關(guān)，通過測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體。
【主要組成成分】
主要成分
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組分 |
數(shù)量 |
主要成分 |
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陰性對照 |
1.0ml/管 |
不含待測物的緩沖液 |
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陽性對照 |
1.0ml/管 |
含待測物的緩沖液 |
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包被微孔板 |
96T |
預(yù)包被固相抗原 |
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HRP標(biāo)記抗體 |
11mL |
HRP標(biāo)記的檢測抗體 |
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樣品稀釋液 |
30mL |
樣品稀釋緩沖液 |
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底物液A |
6mL |
過氧化脲工作液 |
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底物液B |
6mL |
TMB工作液 |
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20×濃縮洗滌液 |
30mL |
含0.15%Tween20的PBS |
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終止液 |
6mL |
硫酸 |
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說明書 |
1份 |
-- |
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自封袋 |
1個 |
-- |
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不干膠 |
2片 |
-- |
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稀釋板 |
1塊 |
-- |
陰陽性對照已經(jīng)通過測試，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后，按照建議的條件保存，樣品稀釋液、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體，有效期為28天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標(biāo)儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫2h，確保充分復(fù)溫到室溫。
2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后10分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置陰陽性對照孔、樣本孔，陰陽性對照孔各加對照品100μL，樣本孔加稀釋后樣本100μL。
5、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
7、所有孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體100μL。
8、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育10min。
10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。
【參考值】
實驗正常的情況下，陰性對照≤0.12，陽性對照≥0.58。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.37為陽性；樣品A值在0.2到0.37之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性。
2.本實驗結(jié)果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應(yīng)疫苗。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
2、陰性結(jié)果
陰性對照的OD值不高于0.12。
3、陽性結(jié)果
陽性對照的OD值不低于0.55。
4、特異性
本試劑盒識別天然和重組豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
5、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存，有效期6個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為28天。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。
技術(shù)提示
1、混合蛋白溶液時，避免起泡。
2、加校準(zhǔn)品與樣本時，每個校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。
3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責(zé)任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。
【基本信息】
企業(yè)名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司
生產(chǎn)地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號
固定電話：0714-6338558
網(wǎng) 址：www.inselisa.com
郵 箱：postmaster@inselisa.com
