北京體視熒光顯微鏡2018報價
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在熒光顯微鏡的基本原理是細胞成分有熒光劑的幫助的非常具體的可視化。這可以是熒光蛋白 - 例如綠色熒光蛋白 - 基因與感興趣的蛋白質(zhì)。如果克隆是不可能的 - 例如組織學標本中 - 這是需要使用其他技術(shù)，如免疫熒光染色來可視化目的蛋白質(zhì)。用于此目的的抗體的利用，這是可以直接或間接地連接到不同的熒光染料和結(jié)合到適當?shù)哪繕私Y(jié)構(gòu)。此外，與熒光染料的徠卡顯微鏡的幫助下，不僅限于蛋白，但它也提供了機會染色核酸，多糖和其他結(jié)構(gòu)?？梢詸z測甚至非生物物質(zhì)，如鈣離子。本文介紹了常用的熒光劑。
熒光免疫
在熒光顯微鏡有兩種方式來可視化你的目標蛋白。無論是與一個固有熒光信號的幫助下 - 這意味著通過克隆，因此基因連接的熒光蛋白與靶蛋白?；蚪柚鸁晒鈽擞浀奶禺愋越Y(jié)合到感興趣的蛋白質(zhì)的抗體。對于一些生物的問題是比較有用的，甚至需要進行后者。在組織學樣品的情況下，例如，它不可能使用的，因為在一般的樣品被從其中不持有任何熒光蛋白的生物來源的熒光蛋白。此外，如果一個有效的抗體可用，免疫比熒光蛋白技術(shù)快得多，是你要克隆的興趣和轉(zhuǎn)染的DNA的基因插入到適當?shù)募毎?。熒光蛋白的另一個缺點在于身為蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)。有了它，它們具有可導致功能障礙或誤解關(guān)于感興趣的附著蛋白的細胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)性的特點。然而，應當認為，使用熒光蛋白是通常選擇的方法來觀察活細胞。
免疫熒光法利用抗體與其抗原的非常特異性結(jié)合親和力的。這可以有兩種不同的外觀。最簡單的方法是使用一種被結(jié)合到感興趣的蛋白的熒光標記的抗體。這就是所謂的直接免疫熒光。
在大多數(shù)情況下，有兩種形式的抗體的使用。第一個結(jié)合靶蛋白并沒有熒光標記本身（第一抗體）。但是，第二個（第二抗體），其結(jié)合第一抗體特異性帶有熒光染料。這種方法被稱為間接免疫熒光和具有若干優(yōu)點。一方面有一個放大的效果，因為多于一個的第二抗體結(jié)合于一個第一抗體。另一方面，沒有必要所有的時間標記每個抗體對您喜歡的蛋白與熒光染料而使用的商業(yè)熒光標記的第二抗體。廣泛使用的熒光染料的免疫是FITC，TRITC或都提到了以下幾個Alexa的Fluor?染料。
異硫氰酸熒光素（FITC）是有機熒光染料仍然在免疫熒光和流式細胞術(shù)使用。它的激發(fā)/發(fā)射峰在517分之495nm和可耦合到不同的抗體，其反應性異硫氰酸酯基，其上結(jié)合的蛋白質(zhì)的氨基，巰基，咪唑基，酪氨?；螋驶膸椭?。它的基本形式 - 熒光素 - 具有332克/摩爾的摩爾質(zhì)量，并經(jīng)常被用來作為熒光示蹤劑。 FITC（388克/摩爾），這是用于熒光顯微鏡和服務為原點進行進一步的熒光染料類的AlexaFluor?488第一的染料之一。其熒光活性是由于其大的共軛芳族電子系統(tǒng)，它是由光的藍色光譜激發(fā)。
