大部分情況下,培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細胞,可以直接適應Balance CD 293 medium,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。
2)漸進式馴化
注意:選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化
①在原培養(yǎng)基中復蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定,當細胞密度達到2x10 6 cells/ml后進行傳代,傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25;
②將細胞置于37℃,5% CO2,轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng);
③當細胞密度3-4天后達到3x10 6 cells/ml且細胞活率>90%,傳代時5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50,細胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細胞生長慢,可離心上清,留20%條件培養(yǎng)基,加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng);
④重復步驟③逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培養(yǎng)基;
⑤經過在100%的 Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng),傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10 6 cells/mL,細胞活率大于90%,這說明細胞已經完全適應了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進行細胞的傳代培養(yǎng)時,細胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。