| 詳細參數(shù) | |||
|---|---|---|---|
| 品牌 | TY | 產(chǎn)品名稱 | 糞便DNA菌群采樣管 |
| 用途類別 | 科研 | 產(chǎn)品顏色 | 白色 |
| 包裝規(guī)格 | 50套/袋 | 貯存方法 | 常溫 |
| 產(chǎn)地 | 中國 | ||
采集方法：
1）用采樣拭子采取足夠數(shù)量的糞便樣本（每管保存液采集至少0.2g新鮮糞便樣品，最多可保存0.5 g糞便樣本）。
2）將帶有足夠數(shù)量樣品的采樣拭子刷放進裝有糞便保存液的小瓶內，并快速攪動十次左右，以洗脫刮刷上樣品，然后從尾部推進采樣拭子頭部，擰緊瓶蓋。
4.保存條件：保存液可在常溫條件下糞便中宿主與微生物的DNA可保存60天，在-20℃和-80℃下可長期保存。
糞便核酸提取方法：
磁珠法（適用于全自動核酸提取儀）
1）轉移600 μl樣品（或稱取糞便樣本180-300 mg）至2 ml離心管中。
2）加入600μlCY1（液體樣本不加CY1），15 μL蛋白酶K，使樣本均勻分散于溶液中。
3）在70℃加熱懸浮液5min（難以溶解的細胞溶解溫度可以提高到95℃）
4）12000rpm離心1min，取出全部上清到新的離心管,加10uL磁珠和0.25mLCY2，充分混勻（可用混勻器），放置在磁力架上靜置約20s，吸掉液體。
5）加入0.6mLCY3液體，充分混勻（可用混勻器），放置在磁力架上靜置約20s，吸掉液體。
6）加入0.6mLCY4液體，充分混勻（可用混勻器），放置在磁力架上靜置約20s，吸掉液體。
7）加入0.6mLCY4液體，充分混勻（可用混勻器），放置在磁力架上靜置約20s，吸掉液體。
8）將離心管從磁力架上取下短暫離心，之后將離心管重新放回磁力架上，吸干液體。
9）室溫干燥5-10min，加50μLCY5液體，混勻；置于65°C空氣培養(yǎng)箱培養(yǎng)10min，期間渦旋混勻三次或置于65℃轉速1600rpm金屬浴中孵育5min； 磁力架上靜置約20s，轉移液體到新的離心管，測OD。
注：OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。
如需去除RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl濃度為100 mg/ml的RNase A溶液，震蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
吸附柱法
1）轉移600 μl樣品（或稱取糞便樣本180-300 mg）至2 ml離心管中。
2）加入600μlCY1（液體樣本不加CY1），15 μL蛋白酶K，使樣本均勻分散于溶液中。
3）在70℃加熱懸浮液5min（難以溶解的細胞溶解溫度可以提高到95℃）
4）12000rpm離心1min，取出全部上清到新的離心管, 加入250 μlCY2，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。蓋上管蓋并渦旋振蕩15 sec，徹底混勻。充分混勻（可用混勻器）。簡短離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。
5） 仔細將離心管中的溶液和絮狀沉淀全部轉移至吸附柱CR2。
注意：如果吸附柱上的液體未能全部離心至收集管中，請加大轉速，延長離心時間至液體完全轉移到收集管中。
6） 加入600 μlCY3，12000rpm離心1min。
7） 加入600 μlCY4，12000rpm離心1min。
8） 洗脫液（無DNA酶的水 ddH2O），12000rpm離心1min。
將吸附柱置于一個新的收集管（無DNA酶的 Centrifuge Tube ）中，向吸附柱膜的中間部位懸空加入50μLCY5，室溫放置2-5分鐘，12000 rpm離心 1分鐘，收集核酸溶液。 
